[1]王宇锋,朱怡凤,殷国志.肝细胞癌中 microRNA1469表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响[J].新乡医学院365bet提现流程_365bet怎么下注_365bet客户端下载,2019,36(09):806-814.[doi:10.7683/xxyxyxb.2019.09.002]
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肝细胞癌中 microRNA1469表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响
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《新乡医学院365bet提现流程_365bet怎么下注_365bet客户端下载》[ISSN:1004-7239/CN:41-1186/R]

卷:
36
期数:
2019年09
页码:
806-814
栏目:
基础研究
出版日期:
2019-09-09

文章信息/Info

作者:
王宇锋;朱怡凤;殷国志
西安交通大学第一附属医院肝胆外科,陕西 西安 710061)
关键词:
microRNA1469肝细胞癌细胞增殖细胞周期细胞侵袭
DOI:
10.7683/xxyxyxb.2019.09.002
摘要:
目的 探讨 microRNA1469(miR1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法 选取 2010年 1月至 2012年 12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的 HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘 >2cm)标本各 76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测 HCC组织及癌旁组织中 miR1469的表达水平,分析 miR1469表达与 HCC临床病理特征的关系,KaplanMeier生存曲线分析 miR1469表达与 HCC患者 3a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测 HCC细胞系 HepG2、Hep3B、SMMC7721、Huh7、Bel7402及正常肝细胞系 LO2中 miR1469的表达水平;培养 Hep3B和 SMMC7721细胞,当细胞融合度达到 70%时,分别应用 miR1469mimics和相应的阴性对照脂质体转染 Hep3B细胞,应用 miR1469inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染 SMMC7721细胞。转染 48h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中 miR1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察 miR1469对 Hep3B和 SMMC7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测 miR1469对 Hep3B和 SMMC7721细胞周期的影响,Transwell实验观察 miR1469对 Hep3B和 SMMC7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Westernblot法检测 Hep3B和 SMMC7721细胞中 NDRG1蛋白表达。结果 miR1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为 0.71±0.03、5.49±0.04,HCC组织中 miR1469相对表达量显着低于癌旁组织(P<0.05)。miR1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性(P>0.05)。KaplanMeier生存分析显示,miR1469高表达 HCC患者的 3a总体生存率显着高于低表达者(P<0.05)。miR1469在 LO2、HepG2、Hep3B、SMMC7721、Huh7、Bel7402细胞中的相对表达量分别为 1.01±0.02、0.45±0.01、0.05±0.01、0.61±0.02、0.14±0.01、0.29±0.02;miR1469在 HepG2、Hep3B、SMMC7721、Huh7、Bel7402细胞中的相对表达量显着低于LO2细胞(P<0.05);其中 Hep3B细胞中 miR1469表达量最低,SMMC7721细胞中 miR1469表达量最高。miR1469mimics组和 miR1469controlmimics组 Hep3B细胞中 miR1469相对表达量分别为 4.47±0.15、0.05±0.01,miR1469mimics组 Hep3B细胞中 miR1469相对表达量显着高于 miR1469controlmimics组(P<0.05)。miR1469inhibitors组和 miR1469controlinhibitors组 SMMC7721细胞中 miR1469相对表达量分别为 0.20±0.11、1.00±0.00,miR1469inhibitors组 SMMC7721细胞中 miR1469相对表达量显着低于 miR1469controlinhibitors组(P<0.05)。MTT结果显示,培养 24、48、72h时,miR1469mimics组 Hep3B细胞增殖能力显着低于 miR1469controlmimics组,miR1469inhibitors组 SMMC7721细胞增殖能力显着高于 miR1469controlinhibitors组(P<0.05)。平板克隆实验结果显示,miR1469mimics组和 miR1469controlmimics组 Hep3B细胞的克隆数分别为 17.00±1.73、65.67±2.33,miR1469mimics组 Hep3B细胞的克隆形成能力显着低于 miR1469controlmimics组(P<0.05);miR1469inhibitors组和 miR1469controlinhibitors组 SMMC7721细胞的克隆数分别为 93.00±2.08、27.67±1.45,miR1469inhibitors组 SMMC7721细胞的克隆形成能力显着高于 miR1469controlinhibitors组(P<0.05)。流式细胞术结果显示,与 miR1469controlmimics组比较,miR1469mimics组 G1期 Hep3B细胞显着增多,S期 Hep3B细胞显着减少(P<0.05),但 2组G2期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。与 miR1469controlinhibitors组比较,miR1469inhibitors组 G1 期SMMC7721细胞显着减少,S期 SMMC7721细胞显着增多(P<0.05);但 2组 G2期 SMMC7721细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell实验结果显示,miR1469mimics组 Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为 59.00±208、29.00±2.08,miR1469controlmimics组 Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为 35.00±1.53、20.33±1.45;miR1469mimics组 Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显着高于 miR1469controlmimics组(P<0.05)。miR1469inhibitors组SMMC7721细胞迁移数和侵袭数分别为 26.00±1.16、17.33±0.88,miR1469controlinhibitors组 SMMC7721细胞迁移数和侵袭数分别为 56.33±3.18、44.67±1.45;miR1469inhibitors组 SMMC7721细胞的迁移和侵袭能力显着低于miR1469controlinhibitors组(P<0.05)。Westernblot结果显示,miR1469mimics组和 miR1469controlmimics组Hep3B细胞中 NDRG1蛋白相对表达量分别为 0.23±0.04、1.00±0.00,miR1469mimics组 Hep3B细胞中 NDRG1蛋白相对表达量显着低于 miR1469controlmimics组(P<0.05);miR1469inhibitors组和 miR1469controlinhibitors组SMMC7721细胞中 NDRG1蛋白相对表达量分别为 3.90±0.17、1.00±0.00,miR1469inhibitors组 SMMC7721细胞中 NDRG1蛋白相对表达量显着高于 miR1469controlinhibitors组(P<0.05)。结论 MiR1469在 HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关;miR1469可能通过靶向结合 NDRG1并抑制其表达而抑制 HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。

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更新日期/Last Update: 2019-09-09